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    如何控制微生物實(shí)驗室的質(zhì)量？
     
     
    時(shí)間：2023-06-13 13:38:51| 點(diǎn)擊率：823
     
    
     
    
     
     
    一、幾個(gè)質(zhì)量控制相關(guān)的定義

    質(zhì)量控制：滿(mǎn)足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動(dòng)。
    質(zhì)量保證：為了滿(mǎn)足實(shí)驗室質(zhì)量要求 ，制定相應的計劃，實(shí)施證明（記錄）所進(jìn)行的一系列的系統活動(dòng)
    外部質(zhì)量控制：通過(guò)互相校準和/或檢驗對實(shí)驗室的操作和結果所進(jìn)行的控制
    內部質(zhì)量控制：實(shí)驗室內部采取的以對比分析、跟蹤以及相關(guān)方法，對實(shí)驗室工作的連續性控制計劃。
    質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統元素的文件或文件的集合。

    二、實(shí)驗室要求
    按國家實(shí)驗室認可的概念，是指一個(gè)能夠承擔法律責任的實(shí)體。這里所指的是實(shí)驗室（微檢室）內建立的質(zhì)量管理的保證體系。人員、房屋 設備滿(mǎn)足檢測工作需要。

    1、人員要求
    實(shí)驗室人員的分類(lèi)：管理人員、技術(shù)人員、技術(shù)支持人員等。
    相應崗位的人員，應具備相應的技術(shù)能力，相應的技術(shù)能力證明（證書(shū)及證件）。
    微生物檢驗室因有相應技術(shù)能力的人負責室內的技術(shù)工作。并設立質(zhì)量監督員。

    2、房屋條件要求
    房屋要求：具有適宜、足夠寬敞、通風(fēng)有良好的照明。
    房屋內墻面及地等應采用易于清潔的材料，保持房間清潔。
    房間的設置，以其開(kāi)展的工作內容加以分用，設立專(zhuān)用房間。
    房間的大小還應根據從事實(shí)驗人員的進(jìn)入數量上加以考慮。

    3、環(huán)境設施要求
    專(zhuān)用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）
    特殊環(huán)境的微生物指標控制與記錄（無(wú)菌室等）
    專(zhuān)用工作室的標準操作規程和定期的檢測校準程序。（潔凈室等）
    特殊環(huán)境中的專(zhuān)用設施質(zhì)量控制應符合有關(guān)要求（凈化工作臺）

    三、設備控制和程序

    微生物檢驗常用需監控的設備和儀器：
    1、培養箱（生化培養箱或CO2培養箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、 冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機、天平、。
    2、小計量容器
    3、微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標儀專(zhuān)用等。

    1、高壓滅菌鍋的溫度控制
    高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進(jìn)行檢測。
    生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。
    高壓滅菌鍋由專(zhuān)人按作業(yè)指導書(shū)操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。
    高壓滅菌鍋使用時(shí)，內置物品不能太多，單位體積內的內容物（每瓶?jì)鹊呐囵B基）不能太多。同時(shí)應注意內容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r(shí)間最好不要超過(guò)45min。
    高壓滅菌鍋日常工作記錄應包含以下信息：高壓滅菌的材料、開(kāi)始時(shí)間、壓力/溫度、取出時(shí)間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無(wú)菌培養代替）
    高壓滅菌鍋溫度波動(dòng)范圍：110，115和121±2℃。
    高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。

    2、干燥滅菌箱溫度控制
    干燥滅菌箱日常工作記錄中應包括以下信息：開(kāi)始的時(shí)間、到達滅菌溫度時(shí)的時(shí)間、取出的時(shí)間（或關(guān)閉時(shí)間）。
    干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進(jìn)行溫度測試。
    干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。
    干燥滅菌箱校準時(shí)間一般為一年。

    3、培養基配制用蒸餾水的控制
    對于蒸餾水器來(lái)說(shuō)：按設備說(shuō)明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。
    檢測要求：西歐標準為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導率＜0.5ms/m；細菌數＜50cfu/ml。我們日常用的標準為 ＜10ms/m，未見(jiàn)有細菌指標。
    檢測頻率：1次/每月。
    蒸餾水定點(diǎn)供應，并做好相應的質(zhì)量控制，記錄檢測結果。

    4、天平的管理
    天平放置要求：無(wú)振動(dòng)、無(wú)氣流影響及水平臺面上。
    天平要有使用及運行檢查記錄。
    天平作為計量?jì)x器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進(jìn)行檢定。
    運行檢查頻率按運行計劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠(chǎng)家）給出的標準重量單位進(jìn)行對照

    5、pH計
    pH計使用前應用標準液進(jìn)行校準。
    緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年
    PH7.00 約6個(gè)月
    pH9.00 約6個(gè)月
    電極敏感性檢測及極性恢復。

    6、凈化工作臺的控制
    水平流凈化工作臺工作區域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細菌數＜1個(gè)/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數＜0.49個(gè)/皿.
    凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。
    凈化工作臺高效過(guò)濾膜一般為一年更換一次，并同時(shí)進(jìn)行粒子與細菌沉降檢測。

    7、紫外線(xiàn)燈的控制
    檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過(guò)專(zhuān)用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規范中表明在距離照射無(wú)1米處，要求其強度為90。
    生物測試法：采用一定的菌培養物，經(jīng)一定比例稀釋?zhuān)靠刂圃?00-250個(gè)/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時(shí)設置普通光源的對照組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。

    8、顯微鏡的控制
    顯微鏡應制定作業(yè)指導書(shū)，日常維護記錄及自校記錄。
    顯微鏡應置于無(wú)振動(dòng)，避免灰塵，防潮等要求的環(huán)境。

    9、其它微生物檢測專(zhuān)用儀器的控制
    細菌鑒定儀、酶標儀等設備，工作中常用陽(yáng)性對照檢測其功能正常性。
    儀器的檢定則按有關(guān)的部門(mén)檢定或按自校作業(yè)指導書(shū)進(jìn)行。
    儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。
    儀器專(zhuān)人使用、操作者應取得相應的崗位培訓合格，持證上崗。

    四、培養基質(zhì)量控制

    正確進(jìn)行培養基質(zhì)量控制，并作為一項經(jīng)常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實(shí)驗室今后通過(guò)相應級別的認證，在整個(gè)檢驗質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料。
    現有的依據：衛生部1993年發(fā)布的食品檢驗用干燥培養基生產(chǎn)質(zhì)量控制。但這個(gè)標準不完善。

    1、常用培養基的質(zhì)量控制
    檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標鑒定
    A：感官（外觀(guān)）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等；
    B：PH測定，按各種培養基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應在6.4-7.0之間。
    C：生物學(xué)指標檢定，被檢培養基相應細菌生長(cháng)率測試；菌落大小及特征的檢測。
    生長(cháng)率測試：適用與液體和固體培養基：將菌培養液，用生理鹽水做倍比稀釋?zhuān)『线m稀釋度進(jìn)行平板計數或接種被檢的培養基試管，同時(shí)以按相關(guān)的培養基國標配方新鮮配制的培養基進(jìn)行對照。不低與10%。
    菌落大小測試：劃線(xiàn)分離測試菌，取10個(gè)菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養基無(wú)統計學(xué)差異。

    2、常用培養基質(zhì)量標準
    外觀(guān)和理化標準：
    干粉顏色：淡黃色粉末或呈現本培養基特有的顏色
    溶解后培養基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；
    滅菌后的培養基PH：7.2±2℃為多；個(gè)別弧菌檢驗用培養基pH值偏高為：8.0 ±2℃
    生物學(xué)指標：菌落特征及菌落大小 。

    3、培養基保存環(huán)境
    制成的培養基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應仔細查看存放條件，多數也須放在2-8 ℃條件保存。
    有的培養基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養基。

    4、培養基制備控制程序
    培養基配制所用的儀器設備培養基配制所用的儀器設備必須經(jīng)過(guò)相應的鑒定 。
    配制培養基所用的用具及容器配制培養基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時(shí)可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數分鐘，再用3%鹽酸溶液進(jìn)行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。

    5、培養基配制原料，試劑質(zhì)量控制
    配制好的培養基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。，因為培養培養基吸收空氣中的二氧化碳，會(huì )使培養基變酸，從而影響細菌的生長(cháng)。
    培養基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱(chēng)量，抑制劑要注意合理配伍。

    6、培養基主要原料的質(zhì)量控制
    配制培養基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無(wú)機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養基的質(zhì)量，由此也將影響檢驗質(zhì)量。
    指標有感官、理化、物理、生物學(xué)。

    五、檢測質(zhì)量保證

    定期使用有證標準物質(zhì)和次級標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行內部質(zhì)量控制。實(shí)驗室間的比對或能力驗證，利用相同或不同方法進(jìn)行重復檢測，對留存的樣品進(jìn)行在檢測。

    六、微生物檢驗質(zhì)控方法

    1、菌落計數精密度控制直接計數
    選擇同一標本，要求檢驗人員進(jìn)行菌落計數。
    將大腸菌（25922）或經(jīng)檢定標化的菌片，通過(guò)合適的梯度稀釋?zhuān)x擇合適的稀釋度進(jìn)行菌落計數實(shí)驗操作。36±1℃培養24h進(jìn)行菌落計數。
    菌落計數精密度控制重復計數法

    2、重復計數要求
    自身同一平皿重復計數誤差 小于7.7%
    實(shí)驗人員之間同一平皿重復計數誤差 ±18 .2%
    自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤 小于7.7%
    實(shí)驗人員之間同一梯度計數誤差X±18 .2%范圍
    不同梯度間菌落計數最終誤差 小于7.7%

    3、菌種鑒定質(zhì)控
    菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標進(jìn)行生化、血清等方面的鑒定。
    鑒定質(zhì)量評價(jià)：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結果報告是否正確。每一項設立分值為25分?？偡譃?00分。

    4、內部質(zhì)量控制的推薦頻率
    菌落計數精密度控制：1次/3月；
    菌種鑒定控制：1次/半年或1年
    盲樣測定丟失的對照 1次/半年

    六、實(shí)驗室安全防護

    1、培訓與告之
    實(shí)驗室管理人員及實(shí)驗人員必須了解相關(guān)工作有關(guān)的危險。對招收新職工、工作開(kāi)始發(fā)生變化或使用新方法，啟用新的設備時(shí)，這點(diǎn)尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務(wù)人員都要知道。需要進(jìn)行口頭和書(shū)面兩種方式的通知。有關(guān)儀器必須要有字跡清楚其安全使用的書(shū)面說(shuō)明。

    2、標志
    在進(jìn)行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標志。
    實(shí)驗室的房間必須以使與微生物有關(guān)的危險得以過(guò)免的方式裝置，以使微生物的傳播得到限制，房間還應便于清潔和消除污染．工作臺必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應盡可能地避免污染。

    3、防止空氣污染
    加熱培養蒙或其它化學(xué)物質(zhì)時(shí)，粉塵可擴做到空氣中．這可給工作人員帶來(lái)過(guò)敏反應或出現其它問(wèn)題．因此，設計排風(fēng)裝置很重要，以至包括天平附近的抽風(fēng)點(diǎn)。通常稱(chēng)量應按正確的安全規程進(jìn)行。

    4、有毒有害物防護
    濃酸和堿及其它腐蝕性化學(xué)物質(zhì)和毒性物質(zhì)必須專(zhuān)門(mén)保存，盡可能鎖存，以使它們引起的損害減至最低．
    對實(shí)驗室所用的所有化學(xué)物質(zhì)，實(shí)驗室必須有記述其危險及操作中可能的限制的產(chǎn)品表．
    在所需的范圍內工作人員必須使用人體防護裝置，防護服、手套籌．使用安全設施是實(shí)驗人員的職責污染了的防護員應盡快地更換，離開(kāi)工作室時(shí)，必須脫去。

    5、消除污染和廢物的處理
    實(shí)驗室必須要有關(guān)于應如何消除濺出的微生物污染的書(shū)面說(shuō)明。另外，對廢物的處理，如用過(guò)的培養皿和打碎的玻璃器皿，應有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均經(jīng)高壓滅菌，洗滌工受微生物感染的危險就可以盡可能避免。

        
     
      
      
      
    
     
    
     
     
    
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